El ensayo HET-CAM es una metodología alternativa que reemplaza el uso de conejos en la evaluación de irritación ocular. Utiliza como modelo experimental huevos de gallina y permite estimar el potencial irritante de una sustancia sin causar daño animal.
En el LMA trabajamos cada día para promover y aplicar técnicas que reduzcan, reemplacen o refinen el uso de animales en la experimentación. Entre los ensayos que ofrecemos a las empresas interesadas se encuentra el HET-CAM (Hen’s Egg Test on Chorioallantoic Membrane), una herramienta confiable para evaluar irritación ocular.
El método consiste en aplicar la sustancia de ensayo sobre la membrana corioalantoidea (CAM) del huevo de gallina, una estructura altamente vascularizada que contiene arterias, venas y capilares. Al observar la reacción de estos vasos —como hemorragia, coagulación, lisis (ruptura) o hiperemia (acumulación de sangre)— se determina el grado de irritación que produce la sustancia. La velocidad de aparición y severidad de estos efectos permiten establecer el potencial irritante del producto.
El ensayo HET-CAM surge como una alternativa al tradicional test de Draize, que evalúa irritación ocular aguda en conejos. Aunque el modelo experimental utiliza huevos embrionados, en el período en que se realiza la prueba (entre los días 7 y 9 de incubación) el embrión aún no ha desarrollado su sistema nervioso periférico, por lo que no percibe dolor. Además, diversos estudios han demostrado que los resultados del HET-CAM correlacionan muy bien con los del test de Draize para productos no irritantes o levemente irritantes.
Desde su propuesta original por Luepke en 1985, el ensayo HET-CAM ha sido adaptado en múltiples protocolos (Luepke, ICCVAM 2010, ECVAM DB-ALM n°47 y n°96), que difieren principalmente en el tiempo de exposición y en el modo de cuantificar los fenómenos de irritación. En todos los casos, el ensayo dura 300 segundos, aunque algunos protocolos permiten enjuagar la sustancia tras una breve exposición, simulando el lagrimeo natural del ojo. La elección del protocolo más adecuado depende de las propiedades del producto: por ejemplo, las sustancias coloreadas pueden dificultar la observación, por lo que se recomienda optar por metodologías con enjuague.
En el LMA, además de ofrecer el ensayo HET-CAM como servicio a la industria, también desarrollamos investigaciones propias. En un trabajo publicado, propusimos un algoritmo para seleccionar el protocolo más apropiado según las características fisicoquímicas del producto1. Este trabajo comparó resultados obtenidos mediante metodologías in vitro y ensayos clínicos en la evaluación de irritación ocular provocada por distintos productos cosméticos, constituyendo el primer estudio comparativo de este tipo realizado en Argentina. Su objetivo fue sentar las bases científicas para la implementación nacional de métodos alternativos al uso de animales en la evaluación de seguridad ocular.
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- Rivero, M. N., Lenze, M., Izaguirre, M., Pérez Damonte, S. H., Aguilar, A., Wikinski, S., & Gutiérrez, M. L. (2021). Comparison between HET-CAM protocols and a product use clinical study for eye irritation evaluation of personal care products including cosmetics according to their surfactant composition. Food and chemical toxicology : an international journal published for the British Industrial Biological Research Association, 153, 112229. https://doi.org/10.1016/j.fct.2021.112229
- Gilleron, L., Coecke, S., Sysmans, M., Hansen, E., van Oproy, S., Marzin, D., van Cauteren, H., & Vanparys, P. (1997). Evaluation of the HET-CAM-TSA method as an alternative to the draize eye irritation test. Toxicology in vitro : an international journal published in association with BIBRA, 11(5), 641–644. https://doi.org/10.1016/s0887-2333(97)00074-x